细胞培养基础知识

一、概念解析

1. 细胞系（Cell Line）：当原代培养物中细胞经过首次传代成功后，即形成细胞系，这些细胞源于原代培养物的细胞世系（Lineage of Cells）。

2. 细胞株（Cell Strain）：细胞株指的是通过选择性方法或克隆技术，从原代培养物或细胞系中获取的具备特定特性或标志物的细胞群体。细胞株的特性或标志在整个培养过程中需保持稳定。若细胞无法持续传代或传代次数有限，则称为有限细胞株（Finite Cell Strain）；若可实现连续传代，则称之为连续细胞株（Continuous Cell Strain）。对于人类肿瘤细胞，若在体外培养超过六个月并稳定生长且可持续传代，则可称为连续性株或系。

二、建立细胞系（或株）的要求

细胞是否被认可为已鉴定的细胞系或株，需依具体情况而定，尚无统一标准。对于用作原代培养的细胞，只需确保供体均一，取材部位及组织种类等条件稳定。若用于长期培养，尤其是反复传代的细胞，通常需提供以下信息：

1. 组织来源：需说明细胞供体的物种（人类或动物）、个体性别和年龄，以及采集的器官或组织。如果为肿瘤组织，还需提供相关的临床和病理诊断信息及病历号等。

2. 细胞生物学检测：需了解细胞的生物学特性，包括细胞形态、特异结构、生长曲线、分裂指数及倍增时间等。如果是肿瘤细胞，需进行软琼脂培养、异种移植致瘤实验及正常组织侵润力等测试，以确保其来源及恶性特征。

3. 培养条件和方法：需明确细胞系（或株）适应的培养环境，包括所用培养基、血清种类及用量，以及适宜的pH值。

三、细胞培育的要点及过程

（一）肿瘤细胞培养技术要点

1. 取材：材料主要应来源于外科手术或活检的肿瘤组织。在取材过程中需避免使用坏死组织，需选取瘤细胞活力较好且集中区域的样本，瘤性转移淋巴结或胸腹水是较优良的取材来源。取材后应尽快进行培养，若无法立即培养可选择冻存。

2. 成纤维细胞排除：肿瘤组织中常混杂成纤维细胞，培养时这些细胞可能与肿瘤细胞共同生长，从而抑制癌细胞的生长。因此，在培养前需利用机械刮除法、反复贴壁法、消化排除法等手段，仔细排除成纤维细胞。

3. 提升肿瘤细胞的存活率和生长率：肿瘤细胞在体外培养的难度较大，建立可持续传代的肿瘤细胞系更具挑战性。细胞在原代培养后需要适应新环境以促进生长，因此需采取一些特殊措施，如使用合适的培养基底、细胞生长因子（如胰岛素和雌激素等），并考虑运用动物媒介进行培养。

（二）人类淋巴母细胞建株方法

1. 在离心管中加入4ml肝素抗凝血，并加入2ml RPMI 1640培养基。

2. 混匀后，沿管壁缓慢加入至预置有4ml淋巴细胞分离液的液面上，静置30分钟。

3. 以1500rpm离心15分钟，吸取白细胞层（第二层）至另一离心管中。

4. 使用RPMI 1640培养基清洗白细胞两次，每次添加5ml。

5. 将白细胞接种至1ml RPMI 1640培养基中，加入10μl环胞霉素及100μl EB病毒液，并混匀。

6. 将混合液置于水浴摇床上，40次/分钟，37℃培养3小时。

7. 再次以1500rpm离心15分钟后，将细胞接种至1ml含1mM谷氨酰胺的培养基中，加入10μl环胞霉素，轻轻混匀后在37℃下培养。

8. 经过5天观察细胞转化及生长情况，依此决定是否进行半量换液。通常，半量换液1-2次，同时维持环胞霉素的浓度。

9. 当转化细胞明显上升并出现细胞团块时，可以转入25ml细胞培养瓶中，添加1-2ml培养基，于37℃培养10-15天，并每3-4天观察一次以决定换液及传代的时机。

10. 细胞生长至一定数量后，可进行冻存，冻存前需进行核型分析及存档，以确保相关实验数据的完整性与可靠性。

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