cfDNA(cell-free DNA),即游离DNA,是指存在于细胞外的DNA,广泛存在于血液、唾液和尿液等多种生物体液中。cfDNA主要由细胞凋亡、坏死或主动分泌等过程产生,释放到细胞外。在血液中,它主要存在于血浆或血清中,与血细胞等成分分开。此外,脑脊液、胸腔积液和腹水等其他生物体液中也能检测到cfDNA。
为提取高纯度的cfDNA,通常采用多种方法。其中,利用有机溶剂如酚和氯仿对蛋白质和核酸的不同溶解性进行多次提取,使蛋白质等杂质溶解在有机相中,而DNA则保留在水相中。在后续的乙醇沉淀步骤中,可以获得纯化的cfDNA。该方法优点在于获得的DNA纯度较高,但流程较为繁琐,并需使用有毒的有机溶剂,对实验人员的操作技能要求较高。
另一种常见的方法是基于磁珠的提取技术。磁珠表面的特定基团能够与DNA分子发生特异性吸附。在特定的缓冲液条件下,磁珠可选择性地吸附cfDNA,通过外加磁场将其与杂质分离,进而经过洗涤和洗脱步骤获得纯净的cfDNA。此方法操作简便、快速,易于实现自动化,适合处理多个样本。
此外,利用硅胶膜的特异性吸附特性,可以在高盐和低pH值条件下将生物样本中的cfDNA吸附至硅胶膜,而蛋白质和多糖等杂质则被洗脱掉,最终通过低盐和高pH值的洗脱液将cfDNA从硅胶膜上洗脱下来。此方法操作相对简单且成本较低,适合小规模样本的提取。
不同生物体液中的cfDNA含量和性质差异明显。一般来说,血液中的cfDNA含量相对较高,成为最常用的样本来源,但不同个体及疾病状态下的血液cfDNA含量可能有所不同。保存条件同样重要,若无法及时提取样本,需在适当的条件下保存。血液样本通常需要在4℃下保存,长时间处于不当的保存条件可能会导致cfDNA降解或被核酸酶消化,从而影响提取结果。
对于少量或特殊样本的处理,更倾向于使用回收柱技术进行回收;而对于样本数量较多的情况下,我们推荐使用磁珠法来节省人工成本,减少因人为因素引入的实验误差。88858cc永利官网采用回收柱技术进行游离DNA的高效提取,支持传统离心法或与真空多联器配合使用,免去繁琐的离心步骤,实现快速处理较大样本量。
利用磁珠法,88858cc永利官网能够根据客户需求提供兼容磁力架提取的试剂盒,并预分装适配高通量提取仪。高通量客户在选择时可考虑该品牌的产品。
使用介绍:可从10ml以内的血清/血浆,1ml以内的羊水或脑脊液中提取高纯度的游离DNA。获得的DNA产量高,纯度优秀,适用于酶切、PCR、高通量测序等分子生物学实验。
产品特性:提取的DNA适合qPCR和高通量测序等各种分子生物学实验。回收的DNA在质量上≥100bp,浓度在1-100ng/ml之间,样本量和个体差异影响最终结果。
所需设备包括水浴锅或金属浴(55℃)、磁力架、微型离心机或立式离心机,能够满足广泛的样本兼容性。