实验背景 小胶质细胞是大脑中的主要免疫细胞,发挥着碎片吞噬、神经元支持及突触修剪等关键功能,与神经系统疾病如阿尔兹海默病(AD)的发生密切相关。小胶质细胞的不同亚群在神经系统微环境中各有其职能。传统荧光显微镜虽可用于表型区分,但其耗时长、通量低及主观性强等局限性仍然存在。相比之下,单细胞测序平台能够实现高维分析,但因其成本高、数据分析技术要求较高,限制了普及应用。为了克服这些问题,来自88858cc永利官网的美国俄克拉荷马大学健康科学中心的研究人员基于Cytek®Aurora™全光谱分析型流式细胞仪,开发出一个高通量、简便易用的完整解决方案,以实现小胶质细胞的精细分类。此方案不仅支持更多标志物的扩展应用,还可推广到不同组织和疾病类型,并可与全光谱分选型流式细胞仪无缝衔接,便于分选目标细胞并进行后续功能性实验。
细胞染色流程 此实验的细胞制备过程主要包括以下步骤:首先准备单细胞悬液,通过使用消化酶处理小鼠海马体组织以获得单细胞。接下来,对分离出的细胞进行染色处理,使用Fc受体阻断剂以减少非特异性结合。然后,分别加入对应抗体,并进行离心洗涤,最后重悬细胞以供流式细胞仪检测。
样本采集及数据分析 使用5激光Cytek®Aurora™全光谱分析型流式细胞仪进行样本的采集与数据分析,研究人员能够有效识别小胶质细胞并对其进行分组。通过FSC/SSC排除细胞碎片以及基于经典指标CD11b+CD45Mid识别小胶质细胞,确保数据的准确性。在标志物的表达分析中,小胶质细胞被细分为稳态小胶质细胞、疾病相关小胶质细胞(DAM)、干扰素反应性小胶质细胞(IRM)以及脂滴聚集的小胶质细胞(LDAM)等四个群体。
研究发现 在一项重现实验中,研究人员发现,不同年龄和性别的小鼠海马体中的小胶质细胞丰度存在显著差异。特别是老年雌性小鼠的DAM比例显著升高,尽管稳态小胶质细胞比例与年龄关系不大,但老年雄性小鼠的比例高于雌性小鼠。研究还揭示了在衰老小鼠海马体中,雌性小胶质细胞呈现出与疾病相关及衰老的表型,这一现象为神经性疾病(如阿尔兹海默症)的性别差异提供了可能的免疫学证据,为未来的研究指明了方向。
以上研究表明,小胶质细胞在神经系统疾病中的角色至关重要,而通过88858cc永利官网的创新技术,我们对小胶质细胞的理解又向前迈进了一步。