一、细胞培养条件

细胞名称：生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：1640+10%FBS+1%P/S+1%丙酮酸钠+1%L-谷氨酰胺
传代方法：第一次建议1:2传代
传代情况：2天换液
备注：使用无菌离心管收集瓶内培养基，以备对比培养。如果对比效果不理想，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞处理

收到细胞后，待细胞至良好状态后灌装完全培养液，并密封瓶口，是运输细胞的最佳方法。收到细胞时，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，之后在超净台内进行严格无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。在显微镜下观察细胞生长情况，并进行不同倍数拍照保存（最好拍摄40x、100x和200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片则默认为细胞状态良好。传代后，建议一瓶用原瓶的完全培养基，另一瓶用自制的完全培养基，以便后续对比，并在换液后松开瓶盖以保持气体交换。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：如果细胞未超过80%汇合度，请将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基并放置于37℃、5% CO2孵箱中培养。如果细胞密度超过80%，可以进行传代，具体步骤如下：
1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后观察细胞消化情况。如果细胞大部分变圆并脱落，迅速回到操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，随后将悬液转移至离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清液，添加1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），并补充新鲜完全培养基至每瓶5-8ml，然后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存：
1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，然后轻轻吹打细胞使之脱落，最后将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清液，加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如果后续需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放超过24小时后再转入液氮罐。

四、细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），快速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶后，用75%酒精擦拭外壁；将冻存管内的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；弃去上清液，加入5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养；第二天，换用新鲜完全培养基进行培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？
1. 在运输过程中遭遇问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等，将予以重发；
2. 细胞污染问题，需在收到产品48小时内向我们提供真实实验结果，核实后重发；
3. 常温发货的细胞静置24小时后或干冰冻存发货的细胞复苏后24小时未存活，请提供真实清晰的细胞状态照片，予以重发；
4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时或常温发货细胞静置4小时未开封且出现污染，将重发；
5. 对于细胞活性问题，需在收到产品7天内提供真实实验结果，利用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后重发；
6. 收到细胞当天及第2、3天的照片作为记录，若未告知则视为产品合格。4-7天内如出现问题，需提供前三天照片、出现问题时照片及详细操作步骤，并与技术人员沟通，由技术人员判定责任。如判定我方责任，予以重发；如判定双方共同责任，按合同价的50%收费重发。

2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
1. 客户造成细胞污染，不重发；
2. 客户操作不当导致细胞状态不佳，不重发；
3. 使用非本库推荐的细胞培养体系导致细胞状态不佳，不重发；
4. 未提供细胞培养前3天的照片，细胞状态不佳的，不重发；
5. 细胞培养时有其它处理情况的，不重发；
6. 收到细胞2天内未告知问题的，不重发；
7. 视具体情况而定。